豬偽狂犬病 研制成功區分強弱毒感染的鑒別診斷方法:gG-EKISA(酶聯免疫吸附試驗)和gE-ELISA,gG-LAT(乳膠凝集試驗)和gE-LAT。擬訂出了我國豬偽狂犬病的根除計劃,根據不同豬場、不同情況和實驗室檢測情況,選擇不同的方案與措施。
豬繁殖與呼吸綜合癥:應用原核表達系統,以融合蛋白的形式高效表達了PRRSV的核衣殼蛋白(N蛋白),其含量達到了菌體蛋白含量的32%,該表達產物能與抗N蛋白的單克隆抗體發生特異性反應。活性檢測試驗表明,該蛋白不僅能與PRRSV的多克隆抗血清發生反應,而且反應敏感,非特異性背景較低,與以全病毒為包被抗原進行的ELISA檢測結果相吻合。這為今后以此表達產物為抗原,建立反應敏感、特異、準確的PBRSV的檢測方法,從而替代用制備過程比較復雜的全病毒為抗原進行ELISA檢測奠定了基礎。研究表明,PRBSVORF5編碼的GP5(E)蛋白能在豬體內誘導產生中和抗體,且起主要作用的表位是構象型中和表位,與GP5蛋白的二級結構密切相關。PRRSV中國分離株B13株的ORF基因被正確插入到桿狀病毒的基因組DNA中,構建出了重組病毒AcMNPV-OCC-ORF5,用該重組病毒感染Sf9細胞,獲得了能夠被豬抗PRRSV B13株血清特異識別的表達產物。ORF5基因表達產物與天然蛋白分子量十分接近,說明桿狀病毒表達系統能較適當地進行合成蛋白的加工和修飾,為PRRS基因工程疫苗的研究奠定了基礎。建立了診斷豬繁殖與呼吸綜合癥與日本乙型腦炎的二聯PCR方法。建立了微量免疫滴定技術測定PRRSV TCID50的新方法――免疫染色法。應用蝕斑克隆技術對一株美洲株疫苗弱毒株進行了篩選,選育出高增殖力的、安全高價的弱毒株。
豬圓環病毒感染:分離鑒定了國內PCV毒株。通過DNA序列分析證實,圓環病毒(PCV)中國分離株與國外分離株同源性不是特別高,推測病毒已發生變異。建立并初步應用了檢測PCV的復合PCR方法。
豬細小病毒病:國內已經開始了豬細小病毒病基因工程亞單位疫苗以及核酸疫苗的研究。試驗表明,以PPV結構基因VPI和VP2分別構建的核酸疫苗,均能誘導產生較高水平的體液免疫和細胞免疫。核酸疫苗的生產簡便,成本低廉,有著理想的應用前景。對PPV SY-99株非結構蛋白NS1基因進行了克隆與原核表達,其意義在于檢測NSI的抗體可以用來區別滅活疫苗免疫豬和自然感染豬。
豬乙型腦炎:應用pET-30b(+)表達載體表達的NS1蛋白具有較好的免疫學活性,可作為一種候選亞單位疫苗。
豬鏈球菌病:莢膜2型豬鏈球菌已成為一種重要的新病原菌,致病差異與各菌株的毒力因子是直接相關的。已知的毒力因子有溶菌酶釋放因子(MRP)、細胞外蛋白因子(EF)、溶血素、莢膜多糖以及44K蛋白、IgG結合蛋白、纖毛、粘著素等。其中溶菌酶釋放蛋白(MRP)與細胞外蛋白因子(EF)是豬鏈球菌2型的兩種最重要的毒力因子。基因序列同源性分析結果顯示:我國豬鏈球菌2型江蘇分離株SS2-1毒力因子MRP與EF基因序列與國外分離株的兩毒力因子的序列高度一致。這一結果表明豬鏈球菌2型菌株的毒力因子MRP與EF的基因序列極為保守,從而為2型鏈球菌毒力因子MRP與EF的基因檢測與鑒定以及豬鏈球菌2型菌的免疫研究提供了依據。建立了PCB檢測方法,有利于疾病發生時的快速診斷和流行病學的調查。建立了檢測MRP的PCR方法,全程只需7小時左右,且最低只需100個細菌即能檢出,敏感性和特異性很高。在對臨床分離的致病性豬鏈球菌進行分群鑒定的基礎上,通過隨機擴增多態性DNA(PAPD)技術對其分型,確定了不同菌株間的遺傳距離,挑選出有代表性的菌株制成多價滅活疫苗,用于豬鏈球菌病的免疫防治。建立了鏈球菌特異性間接血凝(I-HA)試驗方法,為鏈球菌的分群鑒定、血清學調查、多價疫苗菌種的選擇以及疫苗應用效果的監測提供了新的檢測手段。鏈球菌病多價滅活疫苗首次在國內明確采用C、D兩強毒菌株作為制苗材料,由于C、D群是國內腦炎型和敗血型鏈球菌病的主要病原,所以這種疫苗具有廣泛的適用性,克服了各地現行的弱毒或滅活的單價苗抗原的片面性和局限性。系統、全面地提出了本病診斷、致病菌的分離和分群鑒定以及疫苗的免疫程序、藥物防治、消毒及管理諸方面一整套綜合措施。
豬接觸傳染性胸膜肺炎:對胸膜肺炎放線桿菌(APP)主要致病因子的致病性及其免疫原性的研究結果表明,這些毒力因子包括莢膜多糖(CP)、脂多糖(LPS)、外膜蛋白(OMP)、細胞毒素(Apx)、轉鐵結合蛋白(TBP)、蛋白酶、滲透因子、菌毛等,并且認為任何一種毒力因子均不能提供完全有效的免疫保護。其中Apx是本菌最重要的毒力因子。現已證明不同血清型的菌株可產生3種Apx,它們具有溶細胞作用,屬于含重復子毒素(repeats-intoxin,RTX)家族。APP有很多血清型,其劃分依據是基于細菌CP及LPS對血清的反應。迄今為止已鑒定出兩個生物型和12個血清型,其中血清5型又分為A、B兩個亞型。建立了用于APP定性的ELISA抗體檢測方法,已編入國家標準。華中農大建立了檢測豬胸膜肺炎放線桿菌的PCR方法。
豬氣喘病(豬支原體肺炎,MPS):在國內首次提出了“規模化種豬場豬氣喘病的防治與凈化措施”方案。該病的發病特點為:(1)品種敏感性強。(2)豬場隱性感染和潛伏性感染豬為主要危害,尤以初產母豬為甚。(3)高感染率種豬場仍以藥物防治為主,配合免疫和生物安全措施,需根據豬場用藥歷史、種豬結構確定適當的藥物,適當的用藥程序比藥物本身更重要。(4)MPS常與多種細菌、病毒及環境因素協同作用,引起豬呼吸道綜合癥(PRDC),多因子包括豬瘟(HC)、豬流感(SI)、偽狂犬病(PR)、豬繁殖與呼吸道綜合癥(PRRS)、克雷伯氏桿菌、副嗜血桿菌(HPS)、豬圓環病毒(PCV)感染與斷奶后多系統衰弱綜合癥(PMWS)、豬胸膜肺炎放線桿菌感染(APP)、豬多殺性巴氏桿菌感染(Pmt),萎縮性鼻炎(AR)、豬霍亂沙門氏菌病等。PRDC臨床表現為嗜眠、厭食、發燒、咳嗽。在18周齡-20周齡發展到嚴重程度,臨床表現明顯,俗稱“呼吸道病18周齡墻”,PCV引起的PMWS和間質性壞死性肺炎(PNDS)是另一個重要的協同因子。在規模化豬場,PRDC特別是其中的PRRS、PCV感染和鏈球菌感染為呼吸道病防治提出了新課題。目前常用于治療該病的藥物有鹽酸土霉素、泰樂菌素、泰妙菌素、林可霉素、克林霉素、喹諾酮類藥物。種豬場為防范MPS發生,一般采取飼料或飲水中全群投藥,藥物投放的時間、種類、劑量、療程應根據豬群狀況確定不同的投藥策略。MPS免疫機理決定了MPS產生免疫的能力相對較弱,以產生體液免疫為主的滅活疫苗免疫能力更弱。
MPS的免疫要點為:(1)總體上,弱毒苗、滅活苗免疫力有限,免疫時控制同圈感染至關重要。(2)多胎母豬或種公豬可以通過藥物使其成為具有抗感染能力的康復豬,或用滅活苗提高其免疫力,以降低帶菌率,生物安全體系與飼養管理要相結合。地方品種豬陽性場或MPS較高感染率豬場凈化方案:須首先對母豬、仔豬進行程序性用藥,仔豬5日齡-7日齡用疫苗免疫,可逐步建成一個免疫場。針對豬場生產狀態,在不影響生產的情況下,采取嚴格淘汰病豬、藥物治療及疫苗預防、強化飼養管理為主的綜合防治措施,使豬氣喘病發病率降低至5%以下,即基本達到控制標準。國外引進豬原種豬場或MPS低感染率自繁自養豬場凈化方案:由國外引進的純種杜、長、大及PIC、達蘭、斯格、迪卡配套系,由于核心場多采用SPF技術,MFS一般很少存在,嚴格隔離飼養和21天斷奶可有效防止MPS的發生,但引進豬場與有MPS的其它豬混群,則須進行疫苗防疫,并適當配合用藥,加強飼養管理和提高生物安全標準,同時對APP、AR、PR、鏈球菌病等綜合控制。有條件的可采用剖腹產建立無特定病原(SPF)豬核心群,積極推廣加藥早期斷奶和早期隔離斷奶技術。另外采用保健養豬的方法提高飼料蛋白的利用率,改善飼舍環境,提高動物自身免疫力,也是減少或避免此病的另一重要方法。
豬附紅細胞體病:目前的診斷主要還只是在血片中查找蟲體,CFT只適于群體檢查,不適于個體檢查,且敏感性低。EUSA的敏感性明顯高于CFT,且能證明E.suis抗原與豬的其它疾病的血清無交叉反應,是一種敏感、快速、特異的診斷方法,但此法不適用于E.suis的診斷。蟲血癥期間,感染豬血液中含有大量E.suis,故可以從血液中抽提DNA,以32P標記制成探針,能區別感染豬和非感染豬,并且不與其它疾病血清中的DNA發生雜交反應。后來又用PCR技術檢查豬附紅體感染,證明感染后24小時即可出現PCR陽性。PCR-DNA雜交技術經常規檢測方法更簡便準確、敏感特異、快速,易于操作,有助于常規分析,但抗體水平具有一定的波動性,陽性結果僅僅在個體檢測中有意義。故應進一步改進以適用于群體檢測。藥物治療方面,目前用于治療該病的藥物雖有多種,但缺乏特效藥物。值得注意的是,大量實驗證明suis為條件致病性病原體,其感染和發病主要與機體免疫狀況有關。當機體免疫系統發育不健全(或免疫系統受到抑制)或抵抗力下降或處于某些應激狀態時,附紅體感染率和發病率上升。