摘要：為了研制無污染，無毒、副作用的綠色飼料添加劑，選擇了馬錢科植物――鉤吻作材料進行了以下研究。①提取了活性成份――生物堿；②研究它對動物的毒性和無毒性劑量；③研究了它對動物的毒性機理和病理；④進行了它對動物免疫功能和對血液學影響的研究；⑤研究了它的促生長作用及其機理；⑥還進行了殘留及臨床增重試驗研究。
關鍵詞：鉤吻活性成份毒性促生長添加劑
ResearchandUtilizationofGelsemiumelegansbenth
YuanhuiWenlixingJiangzhenyun
(AnimalscienceandtechnologycollegeofHunauAgriculturalUniversity,changsha,410128)
Abstract：Todevelopanapinoidfeedadditivewhichispollutionfree、avirulent、andsideeffectfree,thegelsemiumelegansbenth,avegetationofloganiacease,ischosentoperformseveralstudiesthereinafter；①extractactiveingredient――alkaloid；②studyitsvenenousandavirulentdosage；③studyitsvenenosmechanismandpathology；④analyzeitseffectonimmunologicfunctionandhaematology；⑤investigateitsgrowth-promotionandmachanism；⑥doresearchonresidueandweightincrementinclinic.
Key：Gelsemiumelegansbenth；ativeingredient；toxicity；growth-promotionadditives
隨著養殖業的發展，飼料生產量年年攀升，全國每年生產全價飼料達到6000萬噸，因而飼料添加劑量逐年增加，尤其是促生長添加劑品種繁多，例如高砷、高銅、高硒等礦物質元素添加劑，“瘦肉精”等激素添加劑，喹乙醇、抗菌素添加劑，從而造成砷、銅、從動物糞便排出至土壤→植物→動物往復循環，導致環境污染。有的則通過飼料―肉食品等食物鏈進人體內，引起人的過敏，應激，心臟病和繁殖障礙，對人的健康帶來諸多危害。
為了保護生態環境，保護人類的身體健康，研制無污染、無毒、副作用的綠色飼料，實屬必要。從1999年開始從植物中尋找既具有促生長作用，又無殘留毒性的綠色飼料添加劑。在這種背景條件下，我們在翻閱大量文獻資料和篩選的基礎上，選擇了鉤吻這一在南方諸省生長量較多的植物為材料進行研究，現將研究結果報告如下：
1．鉤吻及其生物堿的資料調查，我們查閱了大量資料，獲得：
1.1鉤吻的生態分布：鉤吻，別名：斷腸草、毒根、胡蔓藤、野葛，屬馬錢科植物，纏繞常
綠藤本（見圖），主產于亞洲和北美。在中國主要分布在廣西、云南、貴州、湖南、福建、
江西及浙江等地。在湖南，我們經民間調查和地考察，鉤吻主要分布在郴州、永州、湘西等地。
1.2鉤吻的民間應用情況：《本草綱目》曾載，“斷腸草”人誤食其葉者致死，而羊食其則大肥。豬羊食其葉不但無毒，而且還令其毛澤光潤，增肥和防瘟之效�！稄V西中藥志》記載：“當豬胃納不良時，用鉤吻飼喂，能增加食欲”。
《廣東中獸醫常用草藥》記載，“鉤吻可治牛羊腸炎”，該省養殖戶定期給牛羊服用本植物，且有健胃、殺蟲、快肥之效。據調查，民間有人采用60g鉤吻/d給豬飼喂，僅喂3-5d后見豬食欲猛增，食飽即睡的效果�？傊鳌⒏＝�、廣東、廣西民間均有用鉤吻喂豬的記載。
2．鉤吻生物堿的提取、分離、鑒定及毒性劑量研究
2.1鉤吻生物堿的提取、分離和鑒定
采用95%乙醇提取（100℃水浴回流）和氯仿（65℃回流）提取方法對鉤吻生物堿進行了提取。采用薄層層析、柱層折分離，紫外掃描圖譜比較的鑒定方法進行了鑒定。研究結果表明，醇提取方法較好，能實際應用。從廣西玉林市郊采集的鉤吻，經鑒定主要含有兩種單體，一種為毒性最重的鉤吻素子（koumine），另一種為植物中含量最多的鉤吻素甲（Gelsemine）。[FS:PAGE]
2.2鉤吻堿對動物的毒性及毒性、與無毒性劑量研究
將鉤吻總堿提取物配成10mg/ml的溶液后進行小白鼠的LD50測定和亞慢性毒性試驗，并觀察其毒性劑量反應。
結果表明，鉤吻總堿的ip小白鼠，其LD50為7.38mg/kg體重，LD50的95%可信限范圍為6.76mg/kg-7.94mg/kg。亞慢性毒性試驗結果表明；1/50LD50，1/25LD50和1/15LD50三個劑量組與空白組之間在30d試驗期內，血液學組織病理學均無明顯影響，且無統計學意義。進而說明，1/50LD50的劑量（0.492mg/kg）對小白鼠無明顯毒性作用。
3．鉤吻的毒性機理研究
3.1鉤吻堿對呼吸、心率、血壓的影響
取鉤吻堿，分別按0.5mg/kg、1.0mg/kg、2.0mg/kg、4.0mg/kg和8.0mg/kg體重，給家兔作靜脈注射，采用MS302系統相連，記錄其變化。結果表明，4.0mg/kg能抑制家兔的呼吸運動，后期呼吸不規則或間歇呼吸。4.0mg/kg的鉤吻堿能使家兔心率減慢，心收縮力下降，導致心輸出量減少，血壓下降。這說明毒素直接作用于心臟和抑制延腦呼吸中樞，引起心率變化和呼吸中樞麻痹。
3.2鉤吻堿對胃腸運動和子宮平滑肌的影響
采用靜脈注射，按0.5mg/kg、1.0mg/kg、2.0mg/kg、4.0mg/kg、8.0mg/kg體重和直接滴加（按0.1%、0.2%、0.4%、0.8%、1.6%濃度）鉤吻堿的方法，觀察了家兔在體腸運動和兔離體腸、子宮的收縮運動。觀察結果表明，0.8%濃度的鉤吻堿能輕微抑制家兔的腸蠕動和子宮的收縮，對平滑肌有直接抑制作用，但抑制效果比腎上腺素弱。
4．鉤吻堿對動物的毒性病理學研究
4.1鉤吻堿對動物的毒性病理
按每公斤干鉤吻粉提取的鉤吻堿0.519mg的量計算，并按0.8%能引起家兔毒性作用的劑量，折合成鉤吻干粉，選擇1%、2%、4%的鉤吻干粉添加在肉仔雞的日糧中，飼喂40d，當飼喂到20d后，2%添加量對肉雞具有明顯促生長作用；當添加量達到4%以上時，肉雞出現體重減輕、流涎、垂頭、嗜睡等毒性臨床癥狀，并表現出全身毛血管擴張，所有內臟充血、間質性肺氣腫、心力衰竭、腎出血的毒性病理變化。
4.2鉤吻堿對動物的毒性劑量與無毒性劑量的確定
綜上實驗結果表明，鉤吻總堿按0.5mg/kg體重供給，對動物不產生任何毒副作用；1.0mg/kg體重供給，對動物僅產生呼吸頻率與幅度稍微改變的毒性，且維持時間10min，并無明顯的生理和病理學改變；4.0mg/kg以上鉤吻堿能引起動物中毒。按提取的鉤吻堿量折算，鉤吻干粉2%添加量在日糧中對肉雞具有促進生長的作用。
5．鉤吻的開發與利用研究
5.1鉤吻對動物的復壯增重試驗研究
取一日齡健康仔雞60只，按單因素3處理、2重復隨機試驗設計（第1組為對照組，第2、3組為試驗組），各組基本日糧相同，試驗組加1%和2%鉤吻干粉，飼喂40d，每天8時，15時定時飼喂，統計每天飼料消耗量，分別在5日齡、18日齡、30日齡和40日齡各組逐漸稱重，試驗結束時，經數據處理和統計分析表明，第2、3組平均未重較第1組（對照組）分別提高5.46%、10.75%，料肉比為：對照組，1:2.79，第2組1:2.66，第3組1:2.57。從而證明2%添加量為優。
5.2鉤吻堿對動物的血液學及免疫功能的影響
5.2.1鉤吻堿對小鼠血液學的影響
取體重18-25g小鼠40只，隨機分為4組，每組10只，雌雄各半，第1組為空白組，第2,3,4組為試驗組，每天各灌喂鉤吻堿藥液（10mg/ml）一次，按0.15mg/kg體重，0.30mg/kg和1.5mg/kg分別在灌藥的第5d，第10d，斷尾取血進行RBC數和Hb量測定。
測定結果表明，0.15mg/kg組在第5d和10d和0.3mg/kg組均能提高RBC總數，Hb含量，與對照組比較差異極顯著（P<0.01），而1.5mg/kg組能降低RBC數和Hb量，與對照組比較，在第10d，降低極明顯（P<0.01）。
5.2.2鉤吻堿對肉雞血液學的影響
選定80羽健康1日齡三黃雞，經飼一周后，隨機分為4組，每組20只，第1組為對照組，飼喂基礎日糧，第2,3,4組為試驗組，按基礎日添加1.5%,2%,6%的鉤吻干粉，飼喂49d。在試驗的7d,21d,35d和49d日齡時，分別頸靜脈采血進行RBC總數，Hb含量和血液生化指標的檢測。
研究結果表明，添加鉤吻干粉1.5%劑量、在21日齡時，能顯著提高肉雞RBC數量、TP含量、Hb量和Alb含量（P<0.01）。在2%添加量時，Hb含量極明顯高于對照組（P<0.05），而RBC數，ALb含量、TP含量高于對照組（P<0.05），而6%添加時均能降低各種血液值。
肉雞在21d齡時，1.0mg/kg和2mg/kg組，LDH、AKP、SGPT，SGOT酶活性與對照組比較，差異不顯著（P>0.05），而6%組、其LDH、AKP、SGPT、SGOT活性高于對照組，膽堿酯酶（CHE）活性低于對照組，差異不顯著（P<0.05）。 [FS:PAGE]
在49d齡時，1.5mg/kg和2mg/kg組與對照組比較，各種酶的活性差異不顯著，但在6%的試驗組，LDH、ALP極顯著高于對照組（P<0.01），CHE活性顯著低于對照組（P<0.05）。
從而說明，在基礎日糧中添加1.0%、2%鉤吻干粉能顯著提高肉雞的RBC數，Hb含量，總蛋白含量、白蛋白含量，而6%具有降低的毒性作用。
5.2.3鉤吻堿對動物免疫功能的影響
采用上述試驗的小白鼠和肉雞，在檢測血液學的同時，對其免疫學進行了檢測，分別進行了實驗動物的免疫器官（胸腺、脾臟）重量、外周ANAE+淋巴細胞數量、腹腔巨噬細胞吞噬功能測定，肉雞玫瑰花環形成率的測定，肉雞ND抗體效價檢測。
檢測結果表明，鉤吻堿灌胃時對小鼠和肉雞免疫功能的影響存在著劑量差異，0.3mg/kg劑量組能明顯提高免疫功能（P<0.05），而1.5mg/kg以上，則能降低動物的免疫功能（P<0.05）；飼料添加鉤喂干粉，2%或以下量時能提高肉雞某些免疫功能指標，而6%劑量則能降低某些免疫功能指標。
6．鉤吻堿促進動物生長機理研究
6.1鉤吻堿對動物的鎮靜作用
取健康小白鼠預飼一周后隨機分為5組，進行閾下劑量水合氯醛催眠作用；大白鼠激怒反應和小白鼠能量代謝影響的研究。研究結果表明，按0.5mg/kg體重組，使小白鼠的入睡率比對照組提高了一倍，1.5mg/kg組提高了6倍，而2.5mg/kg組則提高了8倍；由此說明，鉤吻總堿三個劑量組均能協同閾下劑量的水合氯醛對小白鼠的睡眠作用。鉤吻堿對大白鼠激怒反應實驗表明，鉤吻堿對大白鼠由止血鉗所引起的激怒反應有很好的抑制作用，表現出鎮靜的效果。
鉤吻堿對小白鼠的能量代謝影響實驗表明，鉤吻堿能減少機體的能量代謝損失，在非中毒劑量內且隨劑量的增加，能量損失越少。
6.2鉤吻堿對動物胃腸道運動的影響
取健康小白鼠40只，體重20±2g，隨機分為4組，每組10只，按生理鹽水10ml/kg體重和0.5mg、1.5mg、2.5mg/kg體重鉤吻堿組，連續灌胃給藥3d，未次給藥前禁食24h，自由飲水，未次給藥后30min，各鼠均以10%活性碳混懸液20ml/kg灌胃，30min后將小鼠脫頸椎處死，打開腹腔分離腸系膜，剪取上至幽門、下至回盲部的腸管，計算每只小鼠活性碳的移動距離與小腸全長的百分率。
實驗研究表明，生理鹽水組與鉤吻堿3個不同劑量組對推進率呈現輕微抑制作用（P>0.05），且劑量的增大，其推進率下降，鉤吻堿0.5mg/kg體重組、1.5mg/kg組、2.5mg/kg組較生理鹽水組推進率分別減少0.68%、1.03%、4.03%。
6.3鉤吻堿對消化道內菌群數量的影響，對回腸重量、消化酶活性、內容物的PH值的影響
取1d齡健康雛雞60只，按單因素3處理2重復隨機試驗設計，第1組為對照組，第2、3組為試驗組（分別添加1%,2%鉤吻干粉），各組基礎日糧相同，籠養，每天在8h與15h定時定量飼喂。試驗的最后1d，喂飼2h后作頸靜脈放血撲殺，打開腹腔，立即取出十二指腸、肌胃、腸道和胃內容物，分別測定其PH值，大腸桿菌數，乳酸桿菌數，消化酶的活性。
測定結果表明，回腸中的大腸桿菌，第2組比對照組低6.81%，而第3組含量顯著低于對照組（P<0.05），其值降低10.42%。
回腸中的乳酸桿菌數，第2、3組與第1組之間差異不明顯（P>0.05），但第2組和第3組較第1組的菌落數略有增多，其值分別增多2%和3.8%。
回腸鮮重，各組之間差異不明顯（P>0.05）。但肌胃胃蛋白酶活性、十二指腸淀粉酶活性較第1組（對照組）明顯提高，其值分別提高11.6%和26.0%。肌胃內容物的PH值，第2組較第1組僅降低0.18個單位，而第3組較第1組降低0.36個單位，差異明顯（P<0.05），而十二指腸內容物的pH值；第2和第3組較第1組差異不明顯（P>0.05）。
實驗結果表明，鉤吻堿能降低回腸中的大腸桿菌數量，提高乳酸桿菌濃度，增強胃蛋白酶和腸淀粉酶的活性，有利于消化吸收。
7．鉤吻在肌肉和肝臟中的殘留研究
采用薄層層析法，氣相色譜法對日糧中添加2%鉤吻干粉，飼喂30d，60d的肉雞進行肌肉與肝臟鉤吻堿殘留量的檢測。
檢測結果顯示，在程序升溫條件下，鉤吻素子標準品的保留時間為4.0min，在肌肉和肝中的標準品能檢出，但在日糧中添加了2%鉤吻干粉飼喂30d和60d的肉雞的肌肉與肝臟、檢測結果為陰性。從而說明鉤吻堿在體內幾乎不殘留。
參考文獻：
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10．易金娥,袁慧.鉤吻的毒性機理與毒性病理學研究.碩士研究生論文，2002.
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