 |
 |
在現代養豬生產中，為減少豬病的發生和流行，除加強豬場的隔離消毒，減少環境中的病毒等生物安全措施外，還必須制定合理的免疫程序，使得豬體內長期保持抵抗豬病強毒攻擊的有效抗體，而要了解豬體內的有效抗體水平，就必須開展豬病免疫抗體水平監測。目前對抗體水平檢測方法很多，如 ELISA檢測法、DOT-ELISA檢測法和間接血凝法等，這些檢測技術雖然具有微量、特異的優點，但需要條件較好、設備齊全的實驗室和經過專門訓練，具有較高的獸醫微生物專業技術水平的人員操作，1次檢測至少需要4個小時。檢測程序繁瑣，對操作人員要求專業性高，不適合基層獸醫站和養殖場使用。
免疫抗體金標試紙條快速檢測卡是建立在單克隆抗體的基礎上，其檢測結果的特異性及靈敏度大大提高，而且樣品不必預處理，也大大降低了實驗過程中的人為誤差和工作強度；實際操作中只需要按照產品說明進行簡單的操作，不需要任何儀器設備，已廣泛應用在醫學檢驗和農牧業生產中，適用于不同的檢疫和診斷機構，更適合于基層獸醫站及養殖場，為動物疫病的早期診斷和適時免疫提供了新的技術手段。
1、原理(以豬瘟為例說明)
豬瘟抗體快速檢測試紙采用酶聯免疫原理和膠體金層折技術制成，快速檢測豬血清(或血液)中的豬瘟抗體，將豬瘟抗原包被在硝酸纖維素膜的檢測線(T)上，兔抗豬瘟抗體包被在硝酸纖維素膜的質控線(C)上，用膠體金標記的豬瘟抗原干燥后置于玻璃纖維素膜下端。當血清加入加樣孔內，由于層析的原理，血清開始沿紙條移動擋遇上干燥的金標抗原，將其溶解，并帶著金標抗原繼續往上移動，至硝酸纖維素膜的檢測線。如果樣品中有豬瘟抗體存在時，會與玻璃纖維素膜上的金標豬瘟抗原和包被在檢測線上的豬瘟抗原，在檢測線(T)上形成一個夾心的免疫復合物，呈一條紫紅色線。樣品中的抗體越高，色線顏色越深，判定為陽性。如果樣品中沒有豬瘟抗體，在檢測線(T)上沒有色帶出現，判定為陰性。樣品和金標抗原繼續往上移至質控線(C)時，此處的兔抗瘟抗體將會同金標豬瘟抗原結合，在質控線(C)上形成一條紫紅色線，證明本試紙有效。整個試驗僅需5-20分鐘。操作簡便，快速，靈敏度高，準確率達98％以上，直觀，結果容易判定�？谔阋摺慰袢�、藍耳病檢測原理同豬瘟。
2、豬病抗體快速檢測卡使用方法(以豬瘟為例說明)
2．1 操作步驟
2．1．1 在檢測卡的加樣孔內加入2滴(60-100llL)待檢的血清或血液樣品(血液樣品最好加滿樣孔)。
2．1．2 將測試卡平放在桌面上，室溫下靜置5-20分鐘，判斷結果。超過30分鐘，檢測結果只能作為參考。
2．2 結果判定
2．2．1 陽性 在檢測線(T)和質控線(C)同時出現紫紅色線。豬瘟抗體滴度越高，檢測線(T)的顏色越深；若檢測線(T)出現的紫紅色線顏色很淺，則說明為弱陽性。
2．2．2 陰性 只在質控線(C)出現一條紫紅色線。
2．2．3 失效 在檢測線(T)和質控線(C)都不出現紫紅色線，視為失效。
2．3 診斷參
2．3．1 當被檢樣品檢測線(T)條帶的色澤≥對照卡中豬瘟為1：16(口蹄疫為1：64，偽狂犬為1：40)效價時，說明檢測樣品牛豬瘟抗體的滴度較高，不需進行豬瘟疫苗接種免疫。
2．3．2當被檢樣品檢測線(T)條帶的色澤<對照卡中豬瘟為1：16(口蹄疫為1：64，偽狂犬1：40)效價時，說明檢測樣品中豬瘟抗體效價不能有效抵抗豬瘟強毒攻擊，這時應該及時進行豬瘟疫苗接種。
2．3．3 當被檢樣品檢測線(T)處無明顯色帶出現，說明檢測樣品中無豬瘟抗體或抗體水平很低。如果動物群體健康，應當及時進行豬瘟疫苗接種；如果動物群體中有個別動物出現疑似豬瘟病時，則可作為診斷豬瘟病的一個參考依據。
2．4 檢測范圍
2．4．1 外調種豬須逐個檢測，育肥豬按10％～15％比例抽檢。?
2．4．2 自繁種豬檢測，豬瘟效價應不低于1：32(口蹄疫為1：128，偽狂犬為1：80)，抽檢比例為10%～20%。
2．4．3仔豬出生首日至5日齡，測其母源抗體，首免后15-20天，二免后10-15天進行抗體檢測，檢測比例為3％-5％，豬瘟效價不能低于1：16(口蹄疫為1：64，偽狂犬為1：40)。
2．5 注意事項
2．5．1 檢測卡從鋁箔袋取出后應盡快使用，受潮后檢測卡將失效。
2．5．2 檢測卡應在4qC保存，可保存較長時間。室溫下保存有效期為1年。?
2．5．3 口蹄疫、偽狂犬、藍耳病抗體檢測卡使用方法同豬瘟。?
3、檢測卡在現代養豬保健中的作用(以豬瘟為例說明)
3．1 檢測卡可用于檢驗豬瘟疫苗的質量和確定免疫的最適劑量。如養豬專業戶或大型養豬場購買大批量的豬瘟疫苗放在自己場里的冰箱冷凍層內，每次最好購買同一批號
[FS:PAGE](一般以生產日期定批號)的豬瘟疫苗。可以從中取出一瓶疫苗，選擇不同日齡的乳豬、小豬、種豬若干頭，分別應用2頭份、3頭份、4頭份、5頭份豬瘟疫苗進行免疫接種，免疫15天后采血，用抗體免疫金標檢測卡測定抗體滴度。如果各組都能產生抵抗豬病強毒攻擊的免疫抗體時，則可以從中選擇免疫頭份少，抗體滴度高作為本批號疫苗最佳免疫劑量。如果檢測的豬瘟抗體達不到強毒攻擊的最低保護強度時，則應當檢查是否是疫苗本身問題，還是豬群存在有免疫抑制病毒(如圓環病毒)的干擾。這時可以采取更換該廠家不同批號的豬瘟疫苗或另選廠家的豬瘟疫苗，再按上述方法進行不同劑量免疫，來確定是否是該批疫苗失效或是免疫抑制病毒的干擾，判定適宜的免疫劑量。3．2 當母豬分娩時，用豬瘟抗體免疫金標試紙檢測卡檢測母豬的抗體水平。如果在試紙條上只出現1條色線(質控線C)，說明母豬體內的豬瘟抗體滴度已低于抵抗豬瘟強毒攻擊的最低保護強度，母豬應當及時進行豬瘟疫苗接種，同時乳豬應當及時采用超前免疫，以免發生豬瘟病。如果試紙條上出現2條色線，說明豬體內的豬瘟抗體滴度較高，可以抵抗豬瘟強毒的攻擊，就不需要進行超前免疫。因為仔豬可以通過初乳獲得母源抗體，這時仔豬可以按照正常的免疫程序進行預防注射。
3．3 當從外地購進大批量的小豬或種豬時，飼養主自己無法了解購買的小豬是否進行過豬瘟疫苗免疫或免疫是否有效，應使用檢測卡。為了防止豬瘟病發生，選擇什么時間再進行豬瘟免疫最適宜時，則可以根據不同地區、不同日齡的豬，選擇有代表性的豬采血，應用豬瘟抗體免疫金標檢測卡進行快速檢測。通過檢測結果，可以了解整個豬群豬瘟抗體的狀況，以便決定是否及時開展免疫及選擇適宜的免疫劑量，這樣可以避免豬瘟病的發生。?
3．4 在懷疑發生豬瘟病時，可以采集病豬血清(或血液)用豬瘟金標檢測卡檢測。如果發生豬瘟病，豬體血液中沒有豬瘟抗體或抗體滴度很低。當然，發生豬瘟而耐過不死的豬，抗體滴度可能會很高。
3．5 進行疫病監測時，可應用抗體免疫金標檢測卡進行快速檢測。如豬場發生豬瘟病時，常規的處理程序是全面隔離消毒和緊急預防注射。此時豬群特別是種豬場的豬群的抗體滴度差異很大，緊急預防注射疫苗后的抗體滴度水平又會出現明顯的差異。因此，還應當重新了解豬瘟抗體水平，以制定合理的免疫程序，確保豬場的科學保健。
